免疫組化技術(shù)方法改進(jìn)你了解多少？

免疫組織化學(xué)將傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)與傳統(tǒng)免疫學(xué)結(jié)合起來(lái)，既可以在光鏡下或電鏡下觀察組織或細(xì)胞的形態(tài)，實(shí)現(xiàn)組織或細(xì)胞定位；同時(shí)又發(fā)揮了免疫學(xué)中對(duì)特異抗原抗體定性定量的作用。免疫組織化學(xué)技術(shù)是一多步驟、多環(huán)節(jié)、多因素影響的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，有很多干擾因素都可能影響終的檢測(cè)結(jié)果，并造成錯(cuò)誤的判斷。本文就免疫組化中組織的固定、脫水、包埋過(guò)程中的注意事項(xiàng)進(jìn)行可控因素的分析和總結(jié)。

組織固定的目的之一是大限度地保存組織細(xì)胞的抗原性，也是影響免疫組化結(jié)果的關(guān)鍵因素。因此，及時(shí)、恰當(dāng)、完好的固定是制作好的組織切片的基礎(chǔ)。為使組織得到充分固定我們需要做到：①固定的組織新鮮：組織取材后應(yīng)該立即固定，應(yīng)盡快進(jìn)入固定液固定或入液氮冷凍保存。特別是在夏季，如果保標(biāo)本不及時(shí)固定，組織容易收縮變形，并發(fā)生自溶現(xiàn)象。②適宜的固定液：選10%中性緩沖甲醛固定液(pH7.4左右)，固定液為組織塊體積的4～10倍。較好的固定液應(yīng)該具有強(qiáng)滲透力，能迅速滲透入組織內(nèi)部；其次不會(huì)使組織發(fā)生過(guò)度收縮變形，并能使組織內(nèi)易觀察的成分得以凝固為不溶性物質(zhì)；還要使組織達(dá)到硬度，有較好的折光率。③組織塊的體積：組織塊的體積宜小而薄，一般用于免疫組化的組織大小宜為1.0cm×1.0cm×0.2cm。組織太大，內(nèi)部得不到充分固定，導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)破壞，給切片帶來(lái)的困難，還增加非特異性染色，同時(shí)浪費(fèi)試劑。固定液的量 固定組織時(shí)，有足夠的固定液。一般為組織塊體積的10～15倍。固定用的容器足夠大，組織材料不要太多，避免組織中的水分滲出影響固定液的濃度。④恰當(dāng)?shù)墓潭〞r(shí)間：固定的時(shí)間要視組織塊的大小及固定液的種類、濃度、溫度而定。組織塊越大，固定時(shí)間越長(zhǎng)；反之，組織塊越小，固定的時(shí)間越短。固定液的穿透力與濃度呈正比取材后30min內(nèi)固定，小標(biāo)本固定時(shí)間為4～6h，大標(biāo)本為12～16h，固定總時(shí)間不超過(guò)24h為宜。⑤固定后要充分沖洗，以減少染色時(shí)的人工假象。組織固定后，因固定液滲透到組織中，所以沖洗，除去殘留的固定液，否則會(huì)影響下一步的脫水。特別對(duì)于長(zhǎng)時(shí)間固定的標(biāo)本應(yīng)用流水沖洗，盡可能減少色素沉著。對(duì)于混合固定液固定的組織、更要及時(shí)沖洗，否則將影響免疫組織化學(xué)切片的質(zhì)量，產(chǎn)生人工假象。

脫水及包埋：定期更換脫水劑和透明劑可有效防止組織脫水不及透明不夠，并有利于下一步的切片染色觀察，防止免疫組化時(shí)出現(xiàn)的假陽(yáng)性或假陰性以及脫片現(xiàn)象。包埋石蠟對(duì)切片質(zhì)量也有直接的影響，需選用專用的切片石蠟以切片質(zhì)量的穩(wěn)定。