細胞培養(yǎng)基生產(chǎn)和使用常見問題

1.低血清培養(yǎng)基能用肉眼判斷其pH值嗎？

答：低血清培養(yǎng)基中酚紅的含量與普通培養(yǎng)基中的分紅含量不同，不能同通過肉眼觀察通過經(jīng)驗來判定pH值，建議使用pH計進行測定。

2.低血清培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)是什么？

答：平衡鹽一般是由無機鹽及葡萄糖組成的。平衡鹽有Hanks’系統(tǒng)、Earle’s系統(tǒng)、Dulbecco’s磷酸緩沖鹽系統(tǒng)等。199系列培養(yǎng)基、MEM系列培養(yǎng)基均有Hanks’系統(tǒng)的培養(yǎng)基及Earle’s系統(tǒng)的培養(yǎng)基。但是有些培養(yǎng)基均不是以上常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，例如RPMI 1640培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基。MEM(SLM)低血清培養(yǎng)基的平衡鹽系統(tǒng)也不是常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，該平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力強于常規(guī)平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力。

3.谷氨酰胺溶液和碳酸氫鈉的配制方法是什么？

答：以0.2mol/L的 L-谷氨酰胺配制為例：稱取L-谷氨酰胺2.92g，加注射用水100ml，充分?jǐn)嚢杌靹?。?.2μm濾膜正壓過濾**。溶液應(yīng)在4℃下避光保存，2周內(nèi)使用。

以7.5% NaHCO3的配制為例：稱取NaHCO37.5g溶于100ml蒸餾水中過濾**。

4.什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？

答：酚紅在培養(yǎng)基中用作PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。酚紅本身對生物制品質(zhì)量并不會產(chǎn)生影響，可以通過純化技術(shù)去除，但酚紅在無血清培養(yǎng)基可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡，影響細胞生長，當(dāng)然這種作用能被血清所中和或減輕。 酚紅并不是培養(yǎng)基中的一種成分，很多國外的疫苗或抗體生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過程中都使用無酚紅培養(yǎng)基。

5.放置在冰箱中的培養(yǎng)基顏色會發(fā)生變化，為什么？

答：培養(yǎng)基保存于4°C 冰箱中， 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果， 將造成細胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時， 可以通入無菌過濾之CO2， 以調(diào)整pH 值。

6.無血清培養(yǎng)與有血清培養(yǎng)使用的***量一樣嗎？

答：當(dāng)在無血清培養(yǎng)基中添加***時，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結(jié)合和滅活一些***。在無血清培養(yǎng)條件下，***不被滅活，可能對于細胞達到毒性水平。

7.培養(yǎng)基中添加了血清和***后，可長期保存嗎？

答：一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和***時，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些***和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

8.什么是個性化培養(yǎng)基？它有什么優(yōu)點？

答：根據(jù)細胞類型、培養(yǎng)方式和生產(chǎn)工藝等特點所定制的培養(yǎng)基，即個性化培養(yǎng)基。個性化培養(yǎng)基在國外生物制藥企業(yè)被普遍采用，個性化培養(yǎng)基可以為細胞生長提供充足的營養(yǎng)物質(zhì)，能提高細胞的生長速率、培養(yǎng)密度、以及延長細胞維持時間；也可以為細胞生長提供均衡的營養(yǎng)供給，減少細胞有害代謝物質(zhì)的積累，降低對細胞生長的危害；同時對貼壁細胞而言，能增加細胞的貼壁性，并降低培養(yǎng)過程中剪切力對細胞的損傷；個性化培養(yǎng)基可以根據(jù)各戶的特殊需求減少或不使用動物源成分，從而使生物制品**性更有保障。

9.細胞培養(yǎng)基偶然被凍，可否繼續(xù)使用？

答：如果細胞培養(yǎng)基偶然被凍，您應(yīng)該自然溶解培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基。

10.細胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何？

答：動物細胞冷凍保存時常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5 - 10%DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95%原來細胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意：由于DMSO稀釋時會放出大量熱能，故不可將DMSO直接加入細胞液中， 使用前先行配制完成。

11.培養(yǎng)基及其它添加物和試劑可反復(fù)凍融嗎？

答：大部分添加物和試劑多可以凍融3次，如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起水平的降解和沉淀，將會影響它的性能。

12.液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

答：要冷藏?。∫驗橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時，其溶液的pH值會發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利。故液體培養(yǎng)基要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個月到一年。