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乙型肝炎病毒cccDNA檢測方法及應用價值
在乙肝病毒的復制過程中，病毒DNA進入宿主細胞核，在DNA聚合酶的作用下，兩條鏈的缺口均被補齊，形成超螺旋的共價、閉合、環(huán)狀DNA分子（covalently closed circularDNA，cccDNA）。細胞外乙型肝炎病毒DNA是一種松弛環(huán)狀的雙鏈DNA（relaxed circularDNA，rcDNA）分子。cccDNA是乙肝病毒前基因組RNA復制的原始模板，雖然其含量較少，每個肝細胞內(nèi)只有約5～50個拷貝，但對乙肝病毒的復制以及感染狀態(tài)的建立具有十分重要的意義，只有**了細胞核內(nèi)的cccDNA，才能消除乙肝患者病毒攜帶狀態(tài)，是抗病毒**的目標。
細胞外乙型肝炎病毒DNA是一種松弛環(huán)狀的雙鏈DNA（relaxed circularDNA，rcDNA）分子，其兩條鏈均不是閉合的，其中負鏈較長，約3200個堿基，含有乙肝病毒基因組的全長基因，在其5’起始端與3’末端之間有一個數(shù)個堿基的“缺刻”(nick)；正鏈較短，有較大的“缺口”(gap)，其3’末端不固定，故長度是可變的，約為負鏈長度的50%～。在乙肝病毒的復制過程中，病毒DNA進入宿主細胞核，在DNA聚合酶的作用下，兩條鏈的缺口均被補齊，形成超螺旋的共價、閉合、環(huán)狀DNA分子（covalently closed circularDNA，cccDNA）。cccDNA是乙肝病毒前基因組RNA復制的原始模板，雖然其含量較少，每個肝細胞內(nèi)只有約5～50個拷貝，但對乙肝病毒的復制以及感染狀態(tài)的建立具有十分重要的意義，只有**了細胞核內(nèi)的cccDNA，才能消除乙肝患者病毒攜帶狀態(tài)，是抗病毒**的目標。
cccDNA和rcDNA在結(jié)構(gòu)和理化特性上有三點不同：①rcDNA在正鏈與負鏈上均有缺口或缺刻，只是部分區(qū)域互補故能形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，但非超螺旋結(jié)構(gòu)；而cccDNA兩條鏈均是完整的，二者共價互補，形成超螺旋結(jié)構(gòu)。②rcDNA能與蛋白質(zhì)共價結(jié)合，cccDNA則不能。③由于缺口或缺刻的存在，rcDNA可以被一些核酸酶如外切核酸酶Ⅲ(exonuclease Ⅲ)、綠豆核酸酶(mung beannuclease)等降解成寡核苷酸或單核苷酸，而cccDNA則由于是超螺旋且雙鏈結(jié)構(gòu)均是完整的，一般不會被上述酶降解。上述差異是設計和建立cccDNA檢測技術(shù)的基礎。
