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細(xì)胞污染的**方法
培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染,多數(shù)較難處理。在細(xì)胞培養(yǎng)中如果污染細(xì)胞價值不大,宜棄之;在尋找原因后消毒操作室,復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞,再進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
污染細(xì)胞價值較大,又難于重新得到,可采取以下辦法**。
1、**和**的**
***對殺滅**較有效。聯(lián)合用藥比單獨用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。
預(yù)防用藥一般用雙***,污染后**用藥需采用大于常用量5~10倍的沖洗法,于加藥后作用24~48小時,再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期有效。
2、支原體的**
(1) 用MRA處理
用MRA(Mycoplasma Removal Agent)處理細(xì)胞,每4天換一次液,連續(xù)處理15天以細(xì)胞純潔健康,效果好。
(2) 用清洗純化法**支原體污染的方法
細(xì)胞營養(yǎng)馴化→上等細(xì)胞群的篩選→細(xì)胞清洗→反復(fù)離心洗滌。
其原理是利用離心力、細(xì)胞、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差達(dá)到**支原體的目的。由于支原體個體小且除發(fā)酵支原體外多為細(xì)胞外寄生,所以通過反復(fù)洗滌細(xì)胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數(shù)量降低至極限。
如結(jié)合敏感***的抑殺作用,可達(dá)到更好的效果。
(3) 藥物輔助加溫處理
細(xì)胞培養(yǎng)先用藥物處理后,再將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時,可殺死支原體,但對細(xì)胞有**影響。
(4) 使用支原體特異性血清
用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染,因特異抗體可抑制支原體生長,故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性,并且5個月后仍為陰性。
但此法比較麻煩,不如用***方便、經(jīng)濟(jì)。